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簡(jiǎn)單聊聊鎳Ni柱L00666的原理及其使用

更新時(shí)間:2021-10-25點(diǎn)擊次數(shù):3307
  鎳Ni柱L00666是將Ni NTA金屬螯合層析介質(zhì)裝填于層析柱中的即用型親和層析柱,省去了自行裝填層析柱的麻煩和柱效不高的風(fēng)險(xiǎn),介質(zhì)和層析柱的結(jié)合使層析變得高效簡(jiǎn)單。
  
  金屬離子Ni2+預(yù)先螯合在以NTA為配基的瓊脂糖凝膠上,具有吸附容量大、選擇性好、易于再生、成本低等優(yōu)點(diǎn),廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)及多肽的分離純化,尤其是組氨酸標(biāo)記蛋白質(zhì)的高效純化。
  
  鎳Ni柱的原理是過渡金屬通過與電子供體配基上,能與金屬離子相互作用的羧基或氨基的電負(fù)性元素(O,N),形成較穩(wěn)定的金屬螯合物。在IMAC中,一個(gè)Ni2+有六個(gè)配位位點(diǎn),被含有3、4或5個(gè)電子供體基團(tuán)(配位位點(diǎn))的螯合物固定在吸附劑上,而剩下未被占據(jù)的位點(diǎn)暴露于溶液中,能與組氨酸,半胱氨酸,和色氨酸的側(cè)鏈或組氨酸標(biāo)簽的蛋白特異性結(jié)合。
  
  鎳Ni柱L00666的使用:
  
  鎳Ni柱的洗脫通常采用競(jìng)爭(zhēng)洗脫,先用低濃度的咪唑?qū)㈦s蛋白和結(jié)合不牢的蛋白洗去,再用合適的濃度將目的蛋白洗脫。洗脫的先后順序與蛋白的結(jié)合能力相關(guān)。
  
  另外,在鎳Ni柱的使用中,應(yīng)當(dāng)避免緩沖液中存在還原劑和螯合劑,以免Ni2+被還原而脫落。如果柱料使用太久積累了很多雜蛋白,可用EDTA將Ni2+螯合下來,再用NaOH清洗柱料后,重新螯合Ni離子,即可完成再生。鎳Ni柱L00666不用時(shí),應(yīng)保存在20%乙醇中防止長(zhǎng)菌。
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